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　　NanoDrop 2000分光光度計原理使用說(shuō)明

 

　?。?）預熱是保證儀器精度和穩定性的重要步驟。

 

　?。?）試管的潔凈度直接影響實(shí)驗結果。因此，洗碗是特別重要的。用自來(lái)水反復沖洗用過(guò)的小杯，再用蒸餾水沖洗，倒立在濾紙上，晾干后放回小杯盒中。如有必要，對對比色盤(pán)進(jìn)行更細致的處理，如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡，沖洗干凈。

 

　?。?）試管與分光光度計應同時(shí)使用，否則會(huì )造成較大的實(shí)驗誤差。不能用刀代替1.37200光柵分光光度計。

 

　?。?）彩皿中的液體應達到其容量的2/3，太少會(huì )影響實(shí)驗結果，太多會(huì )在測量過(guò)程中容易溢出并污染儀器。試管內的樣品裝載量應在2/3和3/4之間。

 

　?。?）在操作小杯時(shí)，應抓住“粗糙表面”，防止與“光滑表面”接觸而通過(guò)光路。如果小杯表面有液體，用絲綢布擦干，以確保不會(huì )影響平滑的路徑。

 

　?。?）待測溶液濃度過(guò)高時(shí)，應選用光徑較短的試管。吸光度讀數一般應在0.1 ~ 0.8之間。由于毛坯的測量、標準和溶液的測試使用的是相同光徑的試管，所以不需要考慮光徑變化所帶來(lái)的影響。

 

　　在NanoDrop 2000分光光度計的測定過(guò)程中，發(fā)現同一溶液在不同時(shí)間的測定結果不同，即重復性不佳。造成這種差異的原因是什么？除判斷錯誤的因素外，可能的原因如下：

 

　　1、可見(jiàn)光分光光度計預熱時(shí)間不夠或預熱方法不正確，應延長(cháng)預熱時(shí)間或使用正確的預熱方法。

 

　　2、由于長(cháng)期使用，光電變換器的光電轉換效率發(fā)生了變化。此時(shí)標準溶液和待測溶液的吸光度均降低，在相對定量的情況下對結果影響不大。但是，對于這類(lèi)儀器，一般建議連續使用時(shí)間不超過(guò)3h，如果需要較長(cháng)時(shí)間，間歇使用30min。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計的其他問(wèn)題

 

　　1、發(fā)現在測量過(guò)程中一些不良操作不利于儀器的維護，用戶(hù)應盡量避免。如對上述儀器進(jìn)行操作（如澆注溶液）；吸收器置于儀器的表面板上。在實(shí)驗室中與不同儀器的吸收罐混合使用。

 

　　2、防塵防潮，分光光度計NanoDrop 2000一般采用塑料布蓋，不使用時(shí)將整個(gè)儀器蓋住，是一種很好的防塵方法。然而，我發(fā)現很多實(shí)驗室并不需要附加一個(gè)塑料布蓋，但是我使用的是普通的布蓋或由布蓋制成的儀器，除塵效果不如塑料布蓋理想。此外，在塑料布蓋上只放幾袋防潮硅膠，也能更好地發(fā)揮延長(cháng)防潮效果。在防潮時(shí)，如果可見(jiàn)分光光度計帶有防潮干燥筒，應經(jīng)常檢查，發(fā)現變色后立即更換新的或待干燥后再使用。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計種類(lèi)繁多，但有三種類(lèi)型：簡(jiǎn)單型、中等類(lèi)型和類(lèi)型。選擇分光光度計時(shí)需要考慮以下幾個(gè)方面：

 

　　1、波長(cháng)檢測范圍和波長(cháng)選擇方法：儀器波長(cháng)檢測范圍越寬，價(jià)格越高，當然用戶(hù)需要根據自己的需要選擇合適的波長(cháng)范圍；對于簡(jiǎn)單的儀器，波長(cháng)的選擇方法一般是手工搜索，這種重復性較差，儀器中的波長(cháng)可以根據自動(dòng)搜索或掃描的方式設置，第二種類(lèi)型的波長(cháng)掃描速度齒輪也會(huì )增加。

 

　　2、梁式：梁式可分為單梁式、雙梁式或準雙梁式。單光束一般適用于測量給定波長(cháng)的吸光度，不能用于全光譜掃描。雙光束可自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。它可以消除光源不穩定、探測器靈敏度變化等因素的影響，特別適用于結構分析；偽雙光束的優(yōu)點(diǎn)是可以監測光源變化引起的誤差。其原理是將同一單色儀發(fā)出的光分為兩束，一束直接到達檢測器，另一束通過(guò)樣品后到達檢測器。但是，這種方法并沒(méi)有消除引用的影響。

 

　　3、光源：鎢絲燈和鹵鎢燈（320 ~ 2500nm）主要用于可見(jiàn)光區；紫外區主要采用氫燈和氘燈（180-375nm）。氙氣燈可作為紫外和可見(jiàn)光的光源。

 

　　4、樣本支持：簡(jiǎn)單樣本支持為推拉四連桿池框架，一次只能測量一個(gè)樣本，基準和樣本兩次測量；樣品池支架的類(lèi)型為兩種固定類(lèi)型，分別為樣品通道和參考通道，可以同時(shí)測量參考和樣品的吸光值。

 

　　5、狹縫：簡(jiǎn)單的狹縫類(lèi)型一般為定寬模式，狹縫寬度大多為2nm，或1.5nm;該儀器的狹縫是連續可調的，可適應高分辨率的需要。

 

　　6、光學(xué)性能指標：光學(xué)性能的好壞直接影響測量的精度，其中光柵的技術(shù)指標尤為重要。光柵質(zhì)量較好，一般光柵為凹面光柵，與大尺寸凹面光柵對應的凹面光柵槽數較多，因此分辨率和雜散光指數優(yōu)于簡(jiǎn)單儀器。

 

　　7、檢測器：檢測器是將光信號通過(guò)溶液轉換成電信號，利用光電效應放大電信號的裝置。簡(jiǎn)單儀器一般采用光電二極管；中間型儀器采用硅光電二極管；I型儀器使用高靈敏度光電倍增管和紅外探測器。

 

　　8、顯示：簡(jiǎn)易儀器大多為機械表頭或數碼管顯示，無(wú)數據處理器；儀器顯示為液晶顯示或與計算機連接，數據處理可由儀器本身或外部計算機進(jìn)行。

 

　　9、測量方式：NanoDrop 2000分光光度計主要是定點(diǎn)（固定波長(cháng)）吸光度或透射率測量，波長(cháng)掃描測量基本不可能；可顯示透射率、吸光度、濃度直讀、單光束、單點(diǎn)掃描。

 

　　10、測量附件：測量?jì)x器質(zhì)量的一個(gè)重要方面是看儀器是否有豐富的輔助測量設備，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動(dòng)采樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等。

 

　　11、被測樣品狀態(tài)：NanoDrop 2000分光光度計一般測量液體樣品，紅外分光光度計一般可以分析各種狀態(tài)的樣品（氣體、液體和固體）。