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原代細胞培養與細胞株不同，兩者在培養過(guò)程中的操作方法也不一樣。這里對原代細胞操作過(guò)程中容易出現的6個(gè)錯誤及對應方法做一個(gè)說(shuō)明。

以下六種做法都是不正確的，  有這些習慣的使用者們一定要注意改掉錯誤試驗方法

1.長(cháng)時(shí)間水浴解凍

因為原代細胞非常容易受到解凍過(guò)程的影響，所以在37℃水浴鍋中解凍時(shí)，要在水中擺動(dòng)溶解。在細胞半溶后（不要等到全部溶解），迅速拿到生物安全柜或超凈臺中，用1ml的槍?zhuān)槌鍪孪葴蕚浜玫?培養基打入凍存管中，然后抽到培養瓶中，反復進(jìn)行，直*溶解

2.把凍存管的細胞溶解后迅速離心
如果原代細胞溶解后馬上離心，細胞所受的打擊可能比DMSO的毒性還要大，不建議采用這個(gè)方法。用帶有血清的*培養基溶解后鋪瓶，第二天換液去除DMSO。

3.讓原代細胞長(cháng)滿(mǎn)（100%）瓶（皿、板）
原代細胞長(cháng)滿(mǎn)后，細胞會(huì )出現老化。因為原代細胞不是100%的細胞團，把混入的細胞控制在小限度非常重要。建議細胞長(cháng)到90-95%進(jìn)行傳代

4.傳代時(shí)用大量的胰蛋白酶處理
原代細胞傳代時(shí)，要用低濃度的胰蛋白酶消化，在顯微鏡下看到細胞開(kāi)始變圓、脫落后迅速終止胰蛋白酶。建議采用含10%血清的*培養基終止或大豆由來(lái)的蛋白酶終止劑終止。

5.細胞培養后再凍存
原代細胞再凍存后，細胞會(huì )老化、也可能引起機能變化，所以不建議再凍存。細胞再凍存也是細胞死傷的主要原因。

6.原代細胞無(wú)限增殖

原代細胞和細胞系不同，增殖能力是有限的。為了防止遺傳上的變化，盡快開(kāi)始做實(shí)驗。另外，為了防止混入雜細胞比例的增加，要經(jīng)常觀(guān)察細胞形態(tài)