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CFX96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器的操作流程及注意事項
1、開(kāi)始運行儀器
1.1打開(kāi)電腦
1.2打開(kāi)定量PCR儀底座開(kāi)關(guān)
1.3啟動(dòng)CFX Manager軟件
2、放置樣品
2.1將PCR反應體系加入到0.2ml底緣八聯(lián)管,蓋上管蓋;或加入底緣96孔板,用光學(xué)級封膜封好。
注意,必須戴一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應管表面。將反應管按順序放入儀器的加熱孔中。
3、設置程序,運行試驗
3.1定量PCR軟件操作基本步驟為:
a.設置熱循環(huán)程序文件
(protocol tab)
b.設置反應板文件(plate tab)。
c.點(diǎn)擊"start run"鍵,運行程序。
3.2熱循環(huán)程序文件(protocol tab)設置指南:點(diǎn)擊edit(編輯)或create new(創(chuàng )建新程序)
3.3反應板設置文件(plate tab)設置指南:選擇本次試驗所需要使用的熒光染料種類(lèi);單機樣品類(lèi)型;如要某些反應孔*熒光染料對應的樣品類(lèi)型為標準品(standard),點(diǎn)擊‘dilution series’鍵可設置其標準品濃度及稀釋倍數。
3.4點(diǎn)擊‘start run’鍵。單擊open lid(打開(kāi)熱蓋)或close lid(關(guān)閉熱蓋)放置樣品;單擊start run,保存文件,開(kāi)始運行程序。
4、結果分析
4.1PCR反應結束后,軟件會(huì )自動(dòng)計算標準曲線(xiàn)和CT值等。
4.2如需進(jìn)行表達量分析、等位基因分析等,在軟件窗口選擇相應分析功能。
4.3點(diǎn)擊右上方的“Report”鍵,還可輸出結果報告單。
5、關(guān)閉運行儀器
5.1實(shí)驗結束后取出反應管,順序關(guān)閉CFX Manager軟件、定量PCR儀電源,關(guān)閉電腦。
注意!CFX儀器上蓋部分為全自動(dòng)控制,在通電狀態(tài),嚴禁任何人為干涉上蓋開(kāi)啟或關(guān)閉的行為,此類(lèi)行為會(huì )導致上蓋故障,危及儀器使用
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